ⅠNອາຊິດ ucleiciການນໍາສະເຫນີ
ອາຊິດນິວຄລີອິກແບ່ງອອກເປັນອາຊິດ deoxyribonucleic (DNA) ແລະອາຊິດ ribonucleic (RNA), ຊຶ່ງໃນນັ້ນ RNA ຖືກແບ່ງອອກເປັນ ribosomal RNA (rRNA), messenger RNA (mRNA) ແລະໂອນ RNA (tRNA) ຕາມຫນ້າທີ່ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງມັນ.DNA ແມ່ນສຸມໃສ່ຕົ້ນຕໍຢູ່ໃນແກນ, mitochondria ແລະ chloroform, ໃນຂະນະທີ່ RNA ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນແຈກຢາຍຢູ່ໃນ cytoplasm.ໃນຖານະເປັນພື້ນຖານວັດສະດຸຂອງການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອ, ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກມີບົດບາດສໍາຄັນທີ່ສຸດໃນການຄົ້ນຄວ້າຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນແລະການວິນິດໄສໂມເລກຸນທາງດ້ານຄລີນິກ.ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນແລະຄວາມບໍລິສຸດຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic ຈະມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ PCR, ລໍາດັບ, ການກໍ່ສ້າງ vector, ການຍ່ອຍອາຫານຂອງ enzyme ແລະການທົດລອງອື່ນໆ.
Ⅱ ວິທີການສະກັດອາຊິດ Nucleic ແລະບໍລິສຸດ
① ວິທີການສະກັດເອົາ phenol/chloroform
ການສະກັດເອົາ phenol / chloroform ແມ່ນວິທີການຄລາສສິກສໍາລັບການສະກັດເອົາ DNA, ເຊິ່ງສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນໃຊ້ສອງຕົວລະລາຍອິນຊີທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອປິ່ນປົວຕົວຢ່າງ, ການລະລາຍອາຊິດນິວເຄຼຍຂອງ DNA ໂດຍອີງໃສ່ໄລຍະນ້ໍາ, lipids ໃນໄລຍະອິນຊີ, ແລະທາດໂປຼຕີນລະຫວ່າງສອງໄລຍະ.ວິທີການນີ້ມີຂໍ້ດີຂອງຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຕ່ໍາ, ຄວາມບໍລິສຸດສູງແລະຜົນກະທົບທີ່ດີ.ຂໍ້ເສຍແມ່ນການດໍາເນີນງານທີ່ສັບສົນແລະໃຊ້ເວລາດົນ.
② ວິທີ Trizol
ວິທີການ Trizol ແມ່ນວິທີການຄລາສສິກສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA.ວິທີການ Trizol ແບ່ງອອກເປັນໄລຍະນ້ໍາແລະໄລຍະອິນຊີຫຼັງຈາກການ centrifugation ກັບ chloroform, ໃນ RNA ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນໄລຍະນ້ໍາ, ໄລຍະນ້ໍາໄດ້ຖືກໂອນເຂົ້າໄປໃນທໍ່ EP ໃຫມ່, precipitation ຈະໄດ້ຮັບຫຼັງຈາກເພີ່ມ isopropanol, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ ethanol ບໍລິສຸດ.ວິທີການນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA ຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດ, ຈຸລັງແລະເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ.
③ ວິທີການເຮັດຄວາມສະອາດຖັນ centrifugal
ວິທີການ centrifuge ຖັນ purification ສາມາດ adsorb DNA ໂດຍສະເພາະໂດຍຜ່ານອຸປະກອນການດູດຊຶມ silicon matrix ພິເສດ, ໃນຂະນະທີ່ RNA ແລະທາດໂປຼຕີນສາມາດຜ່ານໄດ້ກ້ຽງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນນໍາໃຊ້ເກືອສູງຕ່ໍາ PH ເພື່ອປະສົມອາຊິດ nucleic, ຕ່ໍາເກືອ PH ສູງ elution ເພື່ອແຍກແລະ purify ອາຊິດ nucleic.ຂໍ້ໄດ້ປຽບແມ່ນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງການເຮັດຄວາມສະອາດສູງ, ຄວາມຫມັ້ນຄົງສູງ, ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງໃຊ້ສານລະລາຍອິນຊີ, ແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຕ່ໍາ.ຂໍ້ເສຍແມ່ນວ່າມັນຕ້ອງໄດ້ຮັບການ centrifuged ຂັ້ນຕອນ, ຂັ້ນຕອນການດໍາເນີນງານຫຼາຍ.
④ ວິທີການລູກປັດແມ່ເຫຼັກ
ວິທີການລູກປັດແມ່ເຫຼັກແມ່ນການແຍກຕົວຢ່າງຈຸລັງຜ່ານ lysate, ປ່ອຍອາຊິດນິວຄລີອິກໃນຕົວຢ່າງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໂມເລກຸນອາຊິດນິວຄລີອິກຖືກດູດຊຶມໂດຍສະເພາະຢູ່ເທິງຫນ້າຂອງລູກປັດແມ່ເຫຼັກ, ໃນຂະນະທີ່ສິ່ງປົນເປື້ອນເຊັ່ນທາດໂປຼຕີນແລະນໍ້າຕານຖືກປະໄວ້ໃນ. ແຫຼວ.ໂດຍຜ່ານຂັ້ນຕອນຂອງການແບ່ງຈຸລັງ, ການຜູກມັດລູກປັດແມ່ເຫຼັກກັບອາຊິດ nucleic, ການລ້າງອາຊິດ nucleic, elution ອາຊິດ nucleic, ແລະອື່ນໆ, ສຸດທ້າຍໄດ້ຮັບອາຊິດ nucleic ບໍລິສຸດ.ຂໍ້ໄດ້ປຽບແມ່ນການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍແລະໃຊ້ເວລາສັ້ນ, ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີ centrifugation ຂັ້ນຕອນ.ມັນມີຄວາມຕ້ອງການດ້ານວິຊາການຕ່ໍາແລະສາມາດຮັບຮູ້ການດໍາເນີນງານອັດຕະໂນມັດແລະມະຫາຊົນ.ການປະສົມປະສານສະເພາະຂອງລູກປັດແມ່ເຫຼັກແລະອາຊິດ nucleic ເຮັດໃຫ້ອາຊິດ nucleic ທີ່ສະກັດອອກມາມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນແລະຄວາມບໍລິສຸດສູງ.ຂໍ້ເສຍແມ່ນລາຄາຕະຫຼາດໃນປະຈຸບັນແມ່ນຂ້ອນຂ້າງແພງ.
⑤ ວິທີການອື່ນໆ
ນອກເຫນືອຈາກສີ່ວິທີຂ້າງເທິງ, ຍັງມີການຕົ້ມ, ວິທີການເກືອເຂັ້ມຂຸ້ນ, ວິທີການຊັກຟອກ anionic, ວິທີການ ultrasonic ແລະວິທີການ enzymatic, ແລະອື່ນໆ.
Ⅲ ປະເພດຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic
Foregene ມີແພລະຕະຟອມ Direct PCR ຊັ້ນນໍາຂອງໂລກ, ເວທີການແຍກ RNA ສອງຄໍລໍາ (DNA ເທົ່ານັ້ນ + RNA ເທົ່ານັ້ນ).ຜະລິດຕະພັນຕົ້ນຕໍລວມມີຊຸດການແຍກ DNA/RNA, PCR ແລະ Direct PCR reagents series molecular lab reagents.
① ການສະກັດເອົາ RNA ທັງໝົດ
ຕົວຢ່າງການສະກັດເອົາ RNA ທັງຫມົດປະກອບມີເລືອດ, ຈຸລັງ, ເນື້ອເຍື່ອສັດ, ພືດ, ໄວຣັສ, ແລະອື່ນໆ ຄວາມບໍລິສຸດສູງແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງຂອງ RNA ທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບໂດຍຜ່ານການສະກັດເອົາ RNA ທັງຫມົດ, ເຊິ່ງສາມາດນໍາໃຊ້ໃນ RT-PCR, ການວິເຄາະຊິບ, ການແປ in vitro, ການໂຄນໂມເລກຸນ, Dot Blot ແລະການທົດລອງອື່ນໆ.
Foregene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຊຸດການແຍກ RNA
ຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງສັດ--ຢ່າງໄວວາແລະປະສິດທິພາບສະກັດ RNA ທັງຫມົດທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດແລະມີຄຸນນະພາບສູງຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດຕ່າງໆ.
ຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງເຊລ--RNA ທັງ ໝົດ ທີ່ບໍລິສຸດແລະມີຄຸນນະພາບສູງສາມາດໄດ້ຮັບຈາກຈຸລັງການລ້ຽງຕ່າງໆພາຍໃນ 11 ນາທີ.
ຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງພືດ--ສະກັດ RNA ທັງໝົດຄຸນນະພາບສູງຈາກຕົວຢ່າງພືດທີ່ມີເນື້ອໃນ polysaccharide ແລະ polyphenol ຕໍ່າ.
ຊຸດການແຍກ RNA ໄວຣັສ-- ແຍກ ແລະ ຊໍາລະໄວ RNA ໄວຣັສຈາກຕົວຢ່າງເຊັ່ນ: plasma, serum, ນ້ໍາໃນຮ່າງກາຍທີ່ບໍ່ມີຈຸລັງແລະ supernatants ວັດທະນະທໍາຈຸລັງ.
② ການສະກັດເອົາ DNA ພັນທຸ ກຳ
ຕົວຢ່າງການສະກັດ DNA Genomic ປະກອບມີດິນ, ອາຈົມ, ເລືອດ, ຈຸລັງ, ເນື້ອເຍື່ອສັດ, ພືດ, ໄວຣັສ, ແລະອື່ນໆ. ການສະກັດເອົາ DNA Genomic ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການຍ່ອຍອາຫານຂອງ enzyme, ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດ DNA, PCR, ການກະກຽມພູມຕ້ານທານ, ການວິເຄາະການປະສົມຂອງ Western blot, chip gene, ສູງ. -throughput sequence ແລະການທົດລອງອື່ນໆ.
Foregene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຊຸດການແຍກ DNA
ຊຸດ DNA ແຍກເນື້ອເຍື່ອສັດ-- ການສະກັດເອົາຢ່າງໄວວາແລະການຊໍາລະລ້າງ DNA ພັນທຸ ກຳ ຈາກຫຼາຍແຫຼ່ງ, ເຊັ່ນ: ເນື້ອເຍື່ອສັດ, ຈຸລັງ, ແລະອື່ນໆ.
ຊຸດ DNA Midi ເລືອດ (1-5ml)-- ຊໍາລະລ້າງ DNA genomic ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງຢ່າງໄວວາຈາກເລືອດ anticoagulated (1-5ml).
Buccal Swab/FTA ບັດຊຸດ DNA Isolation-- ຊໍາລະລ້າງ DNA ພັນທຸ ກຳ ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງຢ່າງໄວວາຈາກຕົວຢ່າງບັດ buccal swab / FTA.
ຊຸດການແຍກ DNA ຂອງພືດ-- ຊໍາລະລ້າງຢ່າງໄວວາແລະໄດ້ຮັບ DNA ພັນທຸ ກຳ ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງຈາກຕົວຢ່າງພືດ (ລວມທັງ polysaccharides ແລະຕົວຢ່າງພືດ polyphenol)
③ ການສະກັດເອົາ Plasmid
Plasmid ແມ່ນປະເພດຂອງ DNA ໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍເປັນວົງໃນຈຸລັງ, ເຊິ່ງເປັນຕົວຂົນສົ່ງທົ່ວໄປສໍາລັບການປະສົມ DNA.ວິທີການສະກັດເອົາ plasmid ແມ່ນເພື່ອເອົາ RNA, ແຍກ plasmid ຈາກ DNA ພັນທຸ ກຳ ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ແລະ ກຳ ຈັດທາດໂປຼຕີນແລະສິ່ງປົນເປື້ອນອື່ນໆເພື່ອໃຫ້ໄດ້ plasmid ບໍລິສຸດ.
ຊຸດ Plasmid Mini ທົ່ວໄປ-- ຊໍາລະລ້າງ DNA plasmid ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງຢ່າງໄວວາຈາກເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ປ່ຽນແປງສໍາລັບການທົດລອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນປົກກະຕິເຊັ່ນການຫັນປ່ຽນແລະການຍ່ອຍອາຫານຂອງເອນໄຊ.
④ການສະກັດເອົາປະເພດອື່ນໆ, ການສະກັດເອົາ miRNA, ແລະອື່ນໆ
ຊຸດການແຍກ miRNA ສັດ- ສະກັດເອົາຊິ້ນສ່ວນ RNA ຂະໜາດນ້ອຍຂອງ 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA ອອກຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດຕ່າງໆ ແລະ ຈຸລັງຕ່າງໆໄດ້ໄວ ແລະ ມີປະສິດທິພາບ.
Ⅳ ຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic ແລະຜົນການຊໍາລະລ້າງs
① ເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຫຼັກຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກ.
②ຫຼຸດຜ່ອນການແຊກແຊງຂອງທາດໂປຼຕີນ, ້ໍາຕານ, lipids ແລະ macromolecules ອື່ນໆ
③ ບໍ່ຄວນມີສານລະລາຍອິນຊີ ຫຼື ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງ ion ໂລຫະທີ່ສາມາດຍັບຍັ້ງເອນໄຊໃນຕົວຢ່າງອາຊິດນິວຄລີອິກ.
④ RNA ແລະການປົນເປື້ອນອາຊິດ nucleic ອື່ນໆຄວນໄດ້ຮັບການກໍາຈັດໃນເວລາທີ່ສະກັດ DNA, ແລະໃນທາງກັບກັນ.
ເວລາປະກາດ: 24-11-2022
